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 　　實驗實例:

　　3D矩陣中的單細胞

　　* HT-1080癌細胞在膠原基質(zhì)球體和類器官培養(yǎng)中遷移的3D活細胞成像

　　球體和類器官培養(yǎng)

　　* 在確定的微圖案上形成球體

　　* 當在灌注下培養(yǎng)時，球體生長率大大提高

　　* 長期培養(yǎng)球體的活/死染色

　　* PDAC細胞和成纖維細胞的類器官共培養(yǎng)

　　* HT-1080癌細胞在3D膠原凝膠中的侵襲

　　* 內(nèi)皮細胞在3D膠原凝膠中的發(fā)芽

　　* L929球體橫截面的共聚焦顯微鏡成像

　　3D中的趨化性和遷移分析

　　* 3D中I型膠原蛋白凝膠內(nèi)皮細胞向FCS梯度的趨化性

　　3D矩陣中的單細胞

　　HT-1080癌細胞在膠原基質(zhì)球體和類器官培養(yǎng)中遷移的3D活細胞成像

　　將表達LifeAct的HT-1080細胞(綠色)接種在1.5毫克/毫升I型膠原蛋白，大鼠尾層(白色)的µ-Slide Chemotaxis細胞趨化載玻片中。通過使用水浸物鏡40x/1.2在蔡司共焦顯微鏡LSM 880 AxioObserver上每300秒拍攝一張照片來記錄細胞遷移。

　　球體和類器官培養(yǎng)

　　在確定的微圖案上形成球體

　　微圖案是優(yōu)化3D分析的強大工具。ibidi的µ-Slides With Multi-Cell µ-Patterns載玻片能夠為各種2D和3D細胞培養(yǎng)應(yīng)用實現(xiàn)空間定義的細胞粘附。被Bioinert生物惰性包圍的確定的粘附點能夠從細胞懸浮液中捕獲所有粘附的單細胞。生物惰性是完全不可附著細胞的。這迫使所有細胞在粘附點處相互聚集，從而以一種確定和可控的方式形成球體 從而以確定和可控的方式形成球體。

　　NIH-3T3細胞(小鼠胚胎成纖維細胞)的球體形成。將單個細胞接種于µ-Slide 8 Well With Multi-Cell µ-Pattern腔室載玻片中。明場顯微鏡，10x物鏡。

　　NIH-3T3細胞球狀體的形成，在將單細胞接種于µ-Slide VI 0.4 With Multi-Cell µ-Pattern通道載玻片中。相差顯微鏡，4x物鏡。

　　NIH-3T3細胞(小鼠胚胎成纖維細胞)在200μm粘附點上的球狀體形成，記錄球狀體生成64小時。相差活細胞成像，4x物鏡。

　　當在灌注下培養(yǎng)時，球體生長率大大提高

　　L929成纖維細胞在µ-Slide spheroid Perfusion，生物惰性(ibidi 80350)，第1-14天，接種濃度為5 × 10 5個單細胞/ml。左:不灌注，隔天換藥。右: ibidi Pump System 泵系統(tǒng)（流體剪切力系統(tǒng)）灌注，0.75 ml/min。相差顯微鏡，10 x物鏡，孔徑800µm。

　　長期培養(yǎng)球體的活/死染色

　　使用 ibidi Pump System 泵系統(tǒng)（流體剪切力系統(tǒng)），灌注培養(yǎng)14天后，在µ-Slide spheroid Perfusion中對L929球體進行活/死FDA/PI染色,0.75 ml/min。綠色:活細胞(二乙酸酸熒光素，F(xiàn)DA);紅色:死細胞(碘化丙啶，PI)。寬場熒光顯微鏡，10x物鏡。

　　PDAC細胞和成纖維細胞的類器官共培養(yǎng)

　　人胰腺癌(PDAC)細胞系PA-TU-8988T(綠色，用CellTrackerTM綠色染色)和小鼠成纖維細胞系mPSC4(紅色，用CellTrackerTM橙色CMTMR染色)在µ-Slide Spheroid Perfusion中共培養(yǎng)的類器官。µ-Slide上覆蓋25µm FEP箔，以便在垂直光片顯微鏡中匹配更接近水的折射率。該圖像是由S. Volkery在慕尼黑工業(yè)大學(xué)用M Squared Aurora Airy光束垂直光片裝置拍攝的。樣品由德國馬爾堡大學(xué)的K. Roth提供。

　　HT-1080癌細胞在3D膠原凝膠中的侵襲

　　將侵襲性人纖維肉瘤癌球體(HT-1080)包埋于ⅰ型膠原蛋白，大鼠尾凝膠中。在µ-Slide 8 Well中記錄對凝膠基質(zhì)的侵入48小時。4倍物鏡，明場。

　　內(nèi)皮細胞在3D膠原凝膠中的發(fā)芽

　　人類臍靜脈內(nèi)皮細胞(HUVEC)球體的活細胞成像，嵌入由I型膠原蛋白，大鼠尾制成的3D凝膠中。在µ-Slide 8孔中記錄凝膠基質(zhì)的發(fā)芽過程44小時，10倍和4倍物鏡，明場。

　　L929球體橫截面的共聚焦顯微鏡成像

　　在µ-Slide spheroid Perfusion中清除(紅色:phalloidin，青色:DAPI)后，染色的L929球體的橫截面共聚焦顯微鏡。球狀體的清除使得甚至在球狀體成纖維細胞的中心的細胞可見，同時保持球狀體的形態(tài)。 更多詳情請點擊查看“Protocol for Spheroid Culture, Staining, and Clearing for 3D Imaging”.數(shù)據(jù)由德國慕尼黑工業(yè)大學(xué)的Julian Hofmann和Selina J. Keppler提供。

　　3D中的趨化性和遷移分析

　　3D中I型膠原蛋白凝膠內(nèi)皮細胞向FCS梯度的趨化性

　　人臍靜脈內(nèi)皮細胞(HUVEC)包埋在1.5µg/ml I型膠原凝膠中的活細胞成像，在µ-Slide Chemotaxis細胞趨化載玻片中，向胎牛血清遷移。注意:在趨化過程中，細胞相互連接形成字符串。相差，4x物鏡，24小時。

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