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 　　管形成實驗是一種簡單但高效的的體外研究方法，用于篩選具有抗血管生成或促血管生成效果的物質(zhì)。這些效果可以通過不同的參數(shù)來衡量，例如管的長度或凝膠表面上形成的環(huán)狀結(jié)構(gòu)數(shù)量。

　　要從管形成實驗中得出高效的分析結(jié)果，需要在實驗前、實驗中和實驗后考慮幾個方面，以確保結(jié)果的準確性和可重復性。

　　本應(yīng)用提供了在收集管形成實驗數(shù)據(jù)后進行分析的指南，并專注于分析和解釋這些數(shù)據(jù)。為優(yōu)化您的實驗，請閱讀應(yīng)用: Optimizing Tube Formation Assays優(yōu)化管形成實驗。

　　ibidi為血管生成實驗提供多種解決方案：

　　1、管形成和血管生成分析的輸出參數(shù)

　　“管”一詞描述的是在二維網(wǎng)狀中可見的細胞索，它 并不一定意味著這些細胞索有管腔。在管形成實驗中，可以從相位對比圖像中確定四個關(guān)鍵參數(shù)，如下圖所示：• 細胞覆蓋面積[%] (藍色區(qū)域)• 管長度[px] (紅色線條)• 分支點數(shù) (白色點)• 環(huán)狀結(jié)構(gòu)數(shù)量 (黃色數(shù)字)這些關(guān)鍵參數(shù)在實驗過程中彼此之間表現(xiàn)出一致的關(guān)系。因此，僅確定一個特征可能就足夠了：在本應(yīng)用說明中，僅將管的長度作為管形成的代表性值。

　　相位圖像（A）和分析圖像（B）顯示了管形成分析的關(guān)鍵特征：細胞覆蓋面積（藍色）、管（紅色）、環(huán)路（黃色）和分支點（白色）。根據(jù)這些參數(shù)，可以計算出其它值，如平均管長、總管長和環(huán)的平均面積。

　　從這些參數(shù)可以計算出更多的值，如平均管長、總管長度和環(huán)狀結(jié)構(gòu)的平均面積。

　　1.1、計算總管長度

　　可以使用專用于管形成實驗分析的各種軟件進行圖像分析。

　　自動化管形成分析的示例輸出示例

　　2、統(tǒng)計分析

　　血管形成是一個涉及各種各樣的生化反應(yīng)和信號通路復雜的過程。因此，建議每種處理條件至少使用三個生物學重復樣本進行統(tǒng)計分析，以獲得代表性值。

　　為了進行可靠的分析并獲得平均值，我們推薦對每個條件進行多孔分析和復制。例如，每個被分析的孔都會得出一個管長值。這些值應(yīng)該針對每個條件進行平均，并計算標準偏差。從同一載玻片上在相同條件下收集的數(shù)據(jù)點之間的標準偏差應(yīng)小于10%。如果孔與孔之間的變化差異太大，則應(yīng)參考以下應(yīng)用指南來優(yōu)化實驗條件：Optimizing  Tube  Formation Assays。

　　以下圖表示例性地顯示了在兩種不同條件（Condition1與Condition2）下生長在 Matrigel®基質(zhì)膠上的HUVEC細胞的總管長。使用搭載于相差顯微鏡上的ibidi Stage Top Incubator進行成像。對于每種條件，在四個不同的時間點（0h、4h、6h 及24h）分別對八個獨立的孔進行了成像。

　　對兩種生物條件下，四個不同時間點(0小時、4小時、6小時和24小時)的八個獨立孔的總管長度進行示例性數(shù)據(jù)分析。單個數(shù)據(jù)以點狀圖(左側(cè))和箱線圖（右側(cè)）的形式顯示。

　　這些單一數(shù)據(jù)點隨后被聚合并展示在一個箱線圖中。統(tǒng)計分析可以通過例如方差分析（ANOVA）或t檢驗（Student’s t-test）來進行，其中將不同條件的數(shù)據(jù)點相互測試。例如，t檢驗（Student’s t-test）提供了證據(jù)，表明兩個獨立的、具有t分布值的數(shù)據(jù)集之間是否存在統(tǒng)計學上的顯著差異。